Q1：产品是否为GMP级别？
A：emc易倍的无血清生产车间是按照GMP标准建设的车间，emc易倍SFM产品的质量体系是按照医疗器械的GMP规范建设。
Q2：冻存液我收到后直接放-20℃了，还能正常使用吗？
A：冻存液冻存后并不会影响冻存液的性能，但是由于冻存时体积增加，可能会导致密封性受到影响，可在4摄氏度融化后用0.22um的滤膜过滤后使用。
Q3：是否接受定制？
A：可以根据您的要求提供定制服务，但需要先和emc易倍的研发人员进行详细沟通，您可以先将您的具体需求告诉我，以便研制中心进行评估。
Q1：使用本产品是否需要加入胰酶终止液？
A：本产品为温和消化酶，无需胰酶抑制剂终止。
Q1： 产品储存注意事项？
A ：基础培养基2-8℃储存，避光。添加组分-20℃储存，避免反复冻融。
Q2：产品是否需要额外添加物质？
A：本产品为kit包装，将基础培养基+添加组分进行配制即可得到完全培养基，可直接进行细胞培养，无需添加额外物质；本产品不含有抗生素成分，如有需要可自行添加。
Q3：消化MSC出现细胞难消化、细胞损伤等问题如何处理？
A：推荐配套使用emc易倍温和消化酶RF01（货号：RF000-N031），消化能力提高，细胞损伤小，存活率高；
Q1：培养基中是否含有L-谷氨酰胺？使用时，是否需要添加？
A：CHO无血清基础培养基CE01、CHO补料培养基CA01α和CHO补料培养基CA01β均不含有L-谷氨酰胺。CHO-K1/gs-宿主细胞，CHO-DG44/dhfr-宿主细胞极其克隆株使用上述产品时，需要额外添加L-谷氨酰胺，终浓度建议4-8mM，其他细胞株均不需要额外添加L-谷氨酰胺。
Q2：培养基中是否含胰岛素、生长因子、蛋白水解物或者多肽？
A：CHO无血清基础培养基CE01、CHO补料培养基CA01α和CHO补料培养基CA01β均不含有胰岛素、生长因子、植物/动物蛋白水解以及多肽等，是不含有任何蛋白质/多肽的、无动物源性、化学成分完全明确的培养基。
Q3：培养基中是否含有抗结团剂？
A：CHO无血清基础培养基CE01含有抗结团剂；CHO补料培养基CA01α和CHO补料培养基CA01β不含。
1. 是否需要添加谷氨酰胺？
需要额外添加终浓度为 6mM 的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺易降解，可每次使用培养基时加入谷氨酰胺，或者分装部分培养基添加谷氨酰胺后一周内使用。
2. 不同体系培养基适应和驯化？
1)需要在培养过程中额外添加终浓度为6 mM的谷氨酰胺；加入谷氨酰胺（Gln）后需一周内使用；
2)不可反复放置于37℃预热。如需37℃预热，可于每次使用前分出所需体积，放于37℃预热，剩余体积及时放回2-8℃冰箱保存；
3)如果细胞原来在其他品牌培养基里培养，可直接用本培养基产品传代培养，传代 3 次（9-10 天）后细胞可适应本培养基产品，活率、细胞密度稳定，可进行后续实验。
4)如果原悬浮293细胞是用其他品牌培养基培养后冻存的，请用冻存时使用的细胞培养基来复苏细胞，传一代后换成本培养基产品，再传代 3 次、细胞状态稳定，可进行后续实验。使用本培养基产品培养后冻存的细胞，则可以使用本培养基产品复苏
3. 如何进行转染？
新复苏的细胞至少需要传代 4 次、且活率达到 90%以上再进行转染，转染前根据需要调整细胞密度为 2-3×106cells/mL。将质粒、转染试剂分别加入无菌 PBS（或转染专用稀释液）中稀释，室温静置 5 分钟。将转染试剂稀释液缓慢加入到质粒稀释液中，混匀，室温孵育 10-20 分钟。将质粒-转染试剂混合物加入悬浮 293 细胞培养液中，放入培养箱中培养。转染后无需换液，48-72 小时后可进行转染效率检测、收获蛋白或病毒等操作。
本培养基产品支持 PEI、脂质体等转染试剂。如细胞密度为 2×106cells/mL，建议添加质粒量为 1µg/mL；如细胞密度为 3×106cells/mL，建议添加质粒量为 1.5µg/mL。如使用 PEI 转染试剂，PEI 与质粒的质量比例建议为 3:1。
4. 如何提高转染？
支持 PEI、脂质体等转染试剂，质粒、转染试剂的稀释推荐用Opti-MEM 培养基（GIBCO 品牌）或无菌 PBS。混合后的转染试剂和质粒加入到293培养体系中，体积占比一般不会超过10%。
5. 如何测定病毒滴度？
1）QPCR法：使用根据慢病毒DNA设计的引物，用慢病毒裂解物为底物进行QPCR分析，根据标准曲线确定慢病毒滴度。
优点：定量、精确； 缺点：非活性计数。
2）稀释法：使用稀释的表达荧光蛋白的慢病毒感染细胞，尽量使1个细胞只接受1个慢病毒感染，72小时后根据荧光细胞数量计算慢病毒滴度。
优点：计算慢病毒活性；缺点：只能用于表达荧光蛋白的慢病毒。
3）流式分析检测：使用表达荧光蛋白的慢病毒感染细胞，使用流式细胞仪分析荧光细胞比例。
优点：快捷方便；缺点：无法定量。
1. 冻存的PBMC细胞可以用吗？
冻存的PBMC细胞可以使用，但是培养效果明显弱于新鲜PBMC。对于冻存的PBMC，建议激活前一天进行静息，即将细胞加入到含有NK培养基、不含包被因子的培养瓶中，放入培养箱过夜再进行激活。
2. 不加血浆效果如何？
扩增效果下降，对于初始NK较低的可能效果更差。
3. 人AB血清能否代替血浆？
可以。
4. 可以支持的细胞培养密度？
培养瓶培养建议4-5 E6/ml ； 袋子建议最高3-4 E6/ml(密度高影响生长，不同培养袋可能表现不同）。
5. 通用型NK客户无法使用血浆怎么办？
可选择NK比例较大的donor。
6. 高分选NK的客户能否使用？
完全可以，应提高血浆比例至5%，接种密度可以适当降低，接种密度范围：0.5-2x10^6 cells/mL。
7. iPS-NK客户能否使用？
有客户使用基础培养基（N012）搭配自有平台因子成功培养iPS-NK 。
8. 培养皿/培养瓶是否需要TC-treated？
需要。
9. 能否使用滋养层细胞？
可以，滋养层细胞可替代细胞因子I和II, 对于某些滋养层细胞，可加IL-2使用，某些滋养层细胞不能单纯加IL-2，仍然需要其他细胞因子，emc易倍有扩增基础试剂盒可以使用。
10. 激活后NK细胞扩增试剂盒P01提供的培养基不够怎么办？
NK细胞扩增基础试剂盒P01（NE000-N032）含有基础培养基、添加组分和细胞因子III，支持细胞扩增，与NK细胞扩增试剂盒P01（NE000-N022）配合使用。
1. 组分：
本产品每1L基础培养基配发8mL添加组分，添加组分不是ICSR或者血替，化学成分明确，可放心使用，必须配成完全培养基后再使用；——可以提供成分说明及TSE/BSE的申明。
2. T细胞激活方式：
使用本产品，可根据说明书用抗体包板方式进行激活，也可购买商业抗体偶联磁珠进行激活，本产品同样支持磁珠激活。
3. 活率：
直接培养PBMC，D5后活率可达90%以上，从PBMC中分选出T细胞，则D3开始活率可达到90%以上，D7后活率均可达到95%以上；如果转导CAR，转导当天活率显著下降，为正常现象，继续培养活率会持续上升。
4. 培养方式：
使用本产品，比较推荐的培养方式是D0天激活，D3、D5、D7补充培养液将细胞密度调整到0.5-1x10^6cells/ml,D7后可选择2天或3天补一次液。
5. T细胞扩增速度：
T细胞的扩增在D3-D9速度较快，基本平稳，D9细胞扩增倍数一般可以达到200倍以上。D9后细胞扩增速度逐渐减缓，激活PBMC中的T细胞，最多可培养20天。
6. 高密度培养：
静置培养，密度可达5-6x10^6 cells/ml，摇瓶培养或其他震荡培养方式，密度可达10x10^6 cells/ml以上。
7. CD4/CD8比例调节：
使用本产品并且用磁珠激活，CD4比例较高，用抗体包板激活则CD8比例较高，可以通过改变激活方式、改变抗体包板浓度，调节CD4/CD8比例。
8. T细胞亚型分群：
Tn为初始T细胞，Tcm为中央记忆型T细胞，Tem为激活的Tcm，Tef为效应T细胞，分群比例随着细胞培养的时间而变化。不同客户对分群的要求可能不同，且不同激活方式、细胞因子的选择以及浓度，对分群影响很大，建议客户自行测试。
9. T细胞转导：
根据客户反馈测试数据，本产品阳性率可达到50%左右，但是不同客户使用的工艺不同，可能导致阳性率有变化。CAR慢病毒转导，可使用polybrene辅助转导，逆转录病毒转导可使用retronectin辅助转导，也有许多新型辅助因子可提高转导效率；采用离心转导的方式可提高转导效率。
10. T细胞生物反应器培养：
静置培养后D5-D7开始在反应器中培养，在达到目标体积之前，可以2-3天补液细胞密度调整到0.5-1x10^6 cells/ml，到达目标体积后可以采取部分灌流策略。
1、文库接头序列错误。核对文库末端序列与试剂盒提供的引物序列是否匹配。 2、稀释度过高。减少稀释倍数，重复实验。 3、文库降解。文库应现用现稀释，稀释好的文库应置于冰上备用，用完丢弃。